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常见问题

PCR扩增不出就引物有问题吗?

作者:荧光定量PCR仪   发布时间:2021-11-01

    PCR扩增不出就引物有问题吗?

    答:基本不是。当今发展出各色各样的PCR扩增技术,各色各样的高温聚合酶,就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出,扩增效率低的问题。如槽式PCR就是扩增那些拷贝数很低的基因片段。 有些重复片段的扩增, GC含量高的片段,非要采用特殊扩增手段才能扩增出了。

    引物扩增不出,主要是下列两种情况比较常见

    (1) RT-PCR。请注意,很多基因通过常规RT –PCR方法是很难不增出来的。 RT-PCR成功的关键在于RT的反应的RNA质量和目标基因在特定组织和细胞中含量。

    (2)从基因组中扩增。一般情况下,基因在基因组中都是单拷贝,基因组作为模板需要严格控制用量。基因组DNA过高,会影响反应体系中的Mg和pH。

    PCR扩增有很强的非特异条带,说明引物有污染吗?

    答:不能。瞧,扩增目标很弱或没有,道是非特异性条带很亮,说明引物不纯或有污染。一些用户如是说。我们曾分析过一些非特异条带,测序发现在这些非特异性片段的两头至少可以发现一条引物序列。我们只能说非特异性扩增一般是模板污染(如RNA中污染基因组)或扩增条件不合适所致。

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