荧光定量PCR标本采集处理和实验过程中要注意些

作者：荧光定量PCR仪   发布时间：2020-05-12

    荧光定量PCR标本采集处理和实验过程中要注意些什么？

    1、标本的采集和处理应该注意什么问题？

    根据实验要求和目的，有针对性采集病灶部位的标本；采集好的标本，最好根据每次实验 用量，用冻存管分成几小份，放在——80℃保存，以免反复冻融；标本通常分成 3 类，如细 胞组织、分泌物、血清全血；如果是血清，不能有融血现象的发生，否则会影响PCR的扩 增；如果是全血，最好不用EDTA作为抗凝剂，选用柠檬酸作为抗凝剂，否则会影响PCR的 扩增；如果是组织，最好用蛋白酶K消化；如果是提RNA的标本，更应该防止反复冻融和保 持标本的新鲜。

    2、在做荧光定量实验时要注意些什么呢？

    A、在操作中，应使用不含荧光物质的一次性手套（经常替换）、一次性移液器吸头（带滤 嘴自卸式），并不能用手直接触摸毛细管、离心管吗底部。

    B、在试剂准备和标本处理时应使用超净工作台(负压式)或防污染罩，以防止对环境的污 染。

    C、操作台、移液器、离心机、PCR 扩增仪等仪器设备应经常用 10%次氯酸或 75%乙醇擦 拭消毒。每次实验前后用 10%次氯酸和 70%乙醇擦拭移液器、操作台。

    D、实验中涉及的有害有毒的标本及试剂应妥善放置，专人保管；废弃物应置专门容器中， 妥善处理。

    E、荧光探针应避光保存，加入反应液中后，应尽快配制好反应体系进行扩增。

    F、配制反应体系时，应注意移液器的使用方法，所有的液体都要缓慢加至管底，不要加至 管壁，所有液体的混匀要用振荡器进行，不能用移液器吹打，反应体系配制完毕后低速离心 数秒，避免产生气泡。

    G、配制反应体系过程中若需标记，请在试管架或离心机管架上标记，不要直接标记在离心管上。