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常见问题

荧光定量PCR标本采集处理和实验过程中要注意些

作者:荧光定量PCR仪   发布时间:2020-05-12

    荧光定量PCR标本采集处理和实验过程中要注意些什么?

    1、标本的采集和处理应该注意什么问题?

    根据实验要求和目的,有针对性采集病灶部位的标本;采集好的标本,最好根据每次实验 用量,用冻存管分成几小份,放在——80℃保存,以免反复冻融;标本通常分成 3 类,如细 胞组织、分泌物、血清全血;如果是血清,不能有融血现象的发生,否则会影响PCR的扩 增;如果是全血,最好不用EDTA作为抗凝剂,选用柠檬酸作为抗凝剂,否则会影响PCR的 扩增;如果是组织,最好用蛋白酶K消化;如果是提RNA的标本,更应该防止反复冻融和保 持标本的新鲜。

    2、在做荧光定量实验时要注意些什么呢?

    A、在操作中,应使用不含荧光物质的一次性手套(经常替换)、一次性移液器吸头(带滤 嘴自卸式),并不能用手直接触摸毛细管、离心管吗底部。

    B、在试剂准备和标本处理时应使用超净工作台(负压式)或防污染罩,以防止对环境的污 染。

    C、操作台、移液器、离心机、PCR 扩增仪等仪器设备应经常用 10%次氯酸或 75%乙醇擦 拭消毒。每次实验前后用 10%次氯酸和 70%乙醇擦拭移液器、操作台。

    D、实验中涉及的有害有毒的标本及试剂应妥善放置,专人保管;废弃物应置专门容器中, 妥善处理。

    E、荧光探针应避光保存,加入反应液中后,应尽快配制好反应体系进行扩增。

    F、配制反应体系时,应注意移液器的使用方法,所有的液体都要缓慢加至管底,不要加至 管壁,所有液体的混匀要用振荡器进行,不能用移液器吹打,反应体系配制完毕后低速离心 数秒,避免产生气泡。

    G、配制反应体系过程中若需标记,请在试管架或离心机管架上标记,不要直接标记在离心管上。

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