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使用实时荧光定量PCR技术定量核酸的原理

作者:荧光定量PCR仪   发布时间:2020-05-15

    实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为:SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用于畜牧兽医领域不同方面的科研工作中,以期得到最优的定量检测效率。
    实时荧光定量PCR技术

    实时荧光定量PCR技术(real—timefluores——成线性关系,从而得出产物的扩增曲线。理想的扩cencequantitativePCR,RTFQPCR)是1996年由增曲线应为J型,符合2N方程(其中N为PCR的循美国AppliedBiosystems公司推出的一种新技术,环次数),但实际上扩增曲线为S型。在PCR反应它不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常早期,不能将产生荧光的水平与背景明显区别,之后规PCR相比,具有灵敏度高、特异性强、有效解决荧光的产生进入指数期、线性期和最终的平台期,因PCR污染问题、自动化程度高等特点。作者综述了此可以在指数期的某一点上检测PCR产物的量,并实时荧光定量PCR技术的基本原理、主要类型、特点及其在畜牧兽医领域的应用。由此推断起始模板含量。

    所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反其中Rn+表示每点测量的荧光强度,代表反应管含应体系中加入荧光基团,利用荧光积累实时监测整有模板DNA;Rn一表示荧光基线强度,代表反应管个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定不含有模板DNA,其在理想情况下是一条平线,只量分析的方法。该技术结合了实时定量PCR仪、实具有背景荧光数值;ARn的值表示PCR过程中,探时荧光定量试剂、通用电脑和自动分析软件,构成针降解的量,也即PCR产物的量。基线(baseline)PCR——DNA/RNA实时荧光定量检测系统。是背景曲线的一段,范围为从反应开始不久荧光值

    荧光探针技术是根据标记基团的荧光共振能量开始变得稳定,当某个荧光基团的发射光荧光阈值(threshold)是以PCR反应前15个循谱与另一个荧光基团的吸收光谱重叠,且2个基团环的荧光信号作为荧光本底信号(baseline),荧光阈距离足够近时,能量可以从短波长(高能量)的荧光值的缺省设置是3"——15个循环的荧光信号标准差的基团传递到长波长(低能量)的荧光基团,相当于短10倍,即:Threshold—IOSD(cycle3——15),一般认波长荧光基团释放的荧光被屏蔽,这个过程称为为在荧光阈值以上所测出的荧光信号是一个可信的FRET。信号,可以用于定义一个样本的Ct值。Ct值也称

    定量原理:实时荧光定量PCR是在反应体系中阈值循环(thresholdcycle),指在PCR循环过程中,加入荧光基团,使产物的数量与检测到的荧光强度荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的拐点所对

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