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常见问题

基因该如何选择?是选择DNA序列还是mRNA序列

作者:荧光定量PCR仪   发布时间:2020-08-06

    今天和大家探讨一下目的基因该如何选择,是选择DNA序列还是mRNA序列呢,选择的原则是什么?其实简单来说就是一句话,如果做相对定量,就查找mRNA序列;如果做绝对定量,就查找DNA序列。那具体在什么情况下我们会选择不同序列呢?

    先来看一下是什么情况选择mRNA序列

    mRNA序列的选择

    1.查找mRNA序列。一般目的是这样的:“我想知道样本中某几个基因表达量哪个高些哪个低些”“我对样品做了处理后想检测某个基因表达量是否有变化、升高或者降低了多少”。这里所说的“基因表达量”实际上就是这个基因所对应的mRNA表达量的变化。因为按经典分子生物学理论,基因是指存在于基因组中的DNA,而它要发挥作用,实际上要通过由它转录出来的mRNA再翻译出的蛋白才真正发挥作用。在生物基因组中这个基因的DNA的多少是不变的,但由它所转录出来的mRNA的量则不是固定的,可能会有变化。所以,可以近似理解为“基因表达量取决于mRNA有多少”。如果要用PCR的方法检测mRNA有多少,就要查找mRNA序列,并以此为基础设计引物。同时注意!!!这时的样品是要准备提取RNA的。在样本的准备以及保存时就要以RNA的标准来做。可千万别弄错了哦

    接下来我们就来看看什么情况下要选择DNA序列呢

    DNA序列的选择

    查找DNA序列。一般目的是这样的:“我要检测在一定量的样本中某个基因有多少个拷贝数”。其中拷贝数(copies)简单的说就是指某个基因的个数。这里所说的“基因”是指在DNA水平上的基因组DNA。比如在一定重量的土壤中一些种类比较接近的多种细菌都可能有一个类似的同名基因,则可根据检测这个基因在单位重量土壤中的数目来推算土壤中这些类细菌的数量。可以近似理解为“想知道有多少个它”。这时就与上文所说的mRNA无关了。所以要查找的是DNA序列,并以此为基础设计引物。这时的样品是要准备提取DNA的。在样本的准备以及保存时就要以DNA的标准来做。

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