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常见问题

PCR扩增中CT值、绝对定量和相对定量是什么?

作者:荧光定量PCR仪   发布时间:2020-07-16

    荧光定量pcr的体系配置和普通PCR没什么区别,因为qPCR的关键在于荧光物质的加入,扩增的过程中会产生大量携带荧光信号的PCR产物。所有的定量PCR仪器都有三个共同的组成部分:检测器、光路系统、热循环模块。每个循环结束后,荧光定量PCR仪通过光学系统记录荧光信号的增加。最后,定量PCR软件计算出数据,用于实验结果的分析。
    荧光定量pcr过程

    首先在PCR扩增反应的最初数个循环里,荧光信号变化不大,接近一条直线,这样的直线即是基线,这条线是可以自动生成也可以手动设置的。之后反应会进入指数增长期,这个期间扩增曲线具有高度重复性,在该期间,可设定一条荧光阈值线,它可以设定在荧光信号指数扩增阶段任意位置上,但一般会将荧光阈值的缺省设置是 3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的10 倍。每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数被称为CT值,这个值与起始浓度的对数成线性关系,且该值具有重现性。
    线性图谱

    *线性图谱
    Ct值

    Ct值最大的意义就是用来计算目的基因的表达量,此时就有两个概念容易被提及,那就是绝对定量和相对定量,绝对定量的目的是测定目的基因在样本中的分子数目,即通常所说的拷贝数。相对定量的目的是测定目的基因在两个或多个样本中的含量的相对比例,而不需要知道它们在每个样本中的拷贝数。
    绝对定量和相对定量

    Ct值诚然可以被利用来计算这两种定量结果,但是绝对定量实验必须使用已知拷贝数的绝对标准品,必须做标准曲线。相对定量可以做标准曲线,也可以不做标准曲线。绝对标准品制作困难难以获取,实验室基本都是选择相对定量的方法来计算相对基因表达量。

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