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常见问题

荧光定量PCR仪的原理和功能概述

作者:迪奈生物   发布时间:2020-04-25

    实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。
    荧光定量PCR仪

    实时荧光定量PCR:在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

    定量PCR仪是在普通PCR仪的基础上加装了荧光激发装置和荧光检测装置,PCR扩增和检测同时进行,最终结果不需进行电泳检测,所以有效地避免了样品间的交叉污染。常规 PCR技术:对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析,无法对起始模板准确定量,无法对扩增反应实时检测。

    实时定量PCR技术:利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。荧光定量PCR仪就是通过对所记录的参数来计算样品的初始模板量的。

    定量PCR常用的三个常用概念

    扩增曲线、荧光阈值、Ct值
    循环数和荧光值曲线

    (1).扩增曲线:反映PCR循环次数和荧光强度的曲线,定量PCR仪每次轮PCR扩增都会自动录荧光强度的变化

    (2).荧光阈值:样本的荧光背景值和阴性对照的荧光值,手动 设置的原则要大于样本的荧光背景值和阴性对照的荧光最高值,同时要尽量选择进入指数期的最初阶 段,并且保证回归系数大于0.99。

    (3).CT值:PCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环 次数。

    荧光定量PCR仪的功能如下:

    1、控制参数(温度)

    2、控制循环数(时间)

    3、记录整个循环过程中的荧光值的变化,在所有的时间和温度条件下,仪器都会忠实的记录下荧光值的变化。

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